白鲨Biosharp BL928A 线粒体膜通透性转换孔检测试剂盒
- 品名： 白鲨Biosharp BL928A 线粒体膜通透性转换孔检测试剂盒
- 型号： BL928A
- 产品详情
- 规格参数
产品简介：
线粒体通透性转换孔检测试剂盒（Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit）是一种采用膜通透性的荧光探针Calcein AM检测线粒体通透性转换孔开放程度的试剂盒。相比于基于线粒体膜电位的方法更直接地检测到线粒体通透性转换孔开放程度的变化。由于Calcein AM的毒性特别低，并且不会抑制细胞的增殖、趋化性等绝大部分功能，所以与其它同类产品如CFDA SE等相比是更适合染活细胞的荧光探针。
本试剂盒的检测原理如下，Calcein AM是一种可以对活细胞进行荧光染色的非极性染料，可通过被动运输进入细胞内并在细胞质组分包括线粒体等中积累。在细胞中，几乎没有荧光的Calcein AM被细胞内的酯酶水解去除乙酰甲酯，生成没有膜通透性的极性荧光染料钙黄绿素（Calcein or Fluorexon），从而使Calcein滞留在细胞内，并使细胞质包括线粒体等呈现强绿色荧光。Calcein本身是一种金属络合指示剂，在生理pH条件下和Co2+、Ni2+、Cu2+、Fe3+和Mn2+等金属离子络合时，荧光信号会发生淬灭。本试剂盒提供了CoCl2用于淬灭细胞质中Calcein的绿色荧光，但由于正常情况下线粒体的MPTP是关闭的，此时CoCl2不能进入线粒体，所以Calcein AM染色后经CoCl2处理会导致仅线粒体内呈现Calcein的绿色荧光。作为对照，可将细胞用Calcein AM染色并经过CoCl2处理之后，用钙离子载体Ionomycin进一步处理以诱导细胞外的Ca2+大量进入细胞内和线粒体基质并导致MPTP的开放，或者用适当的条件刺激细胞导致MPTP少量或大量开放，从而使部分Calcein释放进入细胞浆和钴离子结合而失去荧光，同时细胞浆中的钴离子能进入线粒体内而导致其中的Calcein的绿色荧光部分甚至全部淬灭，最终导致线粒体中Calcein绿色荧光减弱或消失。这样根据线粒体中Calcein绿色荧光的强弱来判断线粒体MPTP开放的程度，绿色荧光越强，开放程度越低，绿色荧光越弱，开放程度越高。
如果用于流式细胞仪，每个样品的检测体系体积为1ml时，可以进行100次检测；96孔板每孔检测体系的体积为100μl时可以检测1000次。
产品组份：
编号 | 产品名称 | 规格 |
BL928A-1 | 检测缓冲液 | 200mL |
BL928A-2 | Calcein AM (1000X) | 110uL |
BL928A-3 | CoCl2 (100X) | 1mL |
BL928A-4 | Ionomycin (200X) | 600uL |
BL928A-5 | 促溶剂（100X） | 1.2mL |
使用方法（仅供参考）：（详细见说明书）
注意事项：
1．荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2．Calcein AM (1000X)须尽量避免反复冻融。如果多次使用，请注意适当分装。
3．CoCl2有腐蚀性，对人体有害或有刺激性，对人体有呼吸道、生殖等特定器官毒性，或致畸致癌毒性，操作时请小心，并确保有效防护以避免直接接触人体或吸入体内，并须注意避免腐蚀其它物品。
4．CoCl2对水生生物有毒或有害，禁止直接排入环境。
5．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件：
-20ºC保存，一年有效。Calcein AM (1000X)和Ionomycin (200X)需要避光保存。
