| Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coli BL21制成的感受态细胞。众所周知，分子伴侣参与蛋白质折叠过程，且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有五种类型的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16)，每一种质粒都是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作“Chaperone team”的分子伴侣。靶蛋白与其中一种“Chaperone team”共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收比率，而用通常方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可回收的。E.coli BL21来源于B株，为Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此，表达的外源蛋白质在该体系中有更高的稳定性。当进行靶蛋白与“Chaperone team”共表达实验时，通常需要三步：1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主E.coli； 2. 用转化体制备感受态细胞；3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。如果使用本产品，只需一步转化就可构建靶蛋白与“Chaperone team”的共表达体系，因为使用的E.coli BL21感受态细胞已转化有一种伴侣蛋白质粒。另外，此感受态细胞有五种质粒，不含有伴侣蛋白质粒的TaKaRa Competent BL21也可作为对照。每种E.coli BL21感受态细胞包括一种伴侣蛋白质粒，非常适合pCold DNA系列的表达。但该产品不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为，宿主E.coli BL21菌株不表达T7 RNA聚合酶。注意：本产品不可用于电击法转化。 ■ DNA序列 pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件) pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件) pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件) pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件) pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件) ■ 保存-80℃。注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。此时，可在使用前用附带的pUC19做转化实验，确认转化效率。不能保存在液氮中。 ■ 转化效率Chaperone competent cells：转化1 ng pUC19，涂于Cm+和Amp+平板上进行筛选。TaKaRa competent cell BL21：转化1 ng pUC19，涂于Amp+平板上进行筛选。转化效率≥1×106 cfu/μg pUC19 ■ GenotypeE.coli BL21 : F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm ■ 注意事项1. 从-80℃中只取出实验所用的感受态细胞，然后立即放入干冰/EtOH bath。开始实验前不要取出。2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube，但可能会降低效率。3. 使用100 μl感受态细胞转化时，高纯度DNA使用量不要超过10 ng，否则转化效率会降低。4. 转化体系改变 (如感受态细胞使用量发生改变) ,或换用了其它tube等，需研讨转化条件 (如使用一般的1.5 ml tube时，请于42℃保温60秒)。5. 除SOC培养基外，L-broth及φb-broth也可使用，但转化效率会有所下降。6. 稀释时，使用SOC培养基。7. L-broth plate :成份per liter Tryptone10 g Yeast extract5 g NaCl5 g 用1N NaOH调整到pH7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。9. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr)，E.coli表达系统中可以使用常用的ColE1型、具氨苄抗性 (Ampr)筛选标记的表达载体，但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。 |
