| E.coli BL21来源于B株，为lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白质在该体系中具有更高的稳定性。本制品有利于外源蛋白质的稳定表达。本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白质表达，但不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为BL21宿主不表达T7 RNA聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不是recA基因缺失型菌株。注意：本制品不可用于电击法转化。 ■ 保存-80℃。注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。可使用附带的pUC19 DNA确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 ■ 质量控制转入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的选择培养基进行筛选。转化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA ■ GenotypeE.coli BL21: F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm ■ 注意事项1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。2. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度质粒DNA。否则转化效率会降低。3. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。4. 使用TE buffer溶解纯化的质粒DNA。DNA溶液如果盐浓度高，可能会降低转化效率。5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。 ·L-broth :Ingredientper liter water Tryptone10 g Yeast extract5 g NaCl5 g 用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。 ·φb-broth:Ingredientper liter water Tryptone20 g Yeast extract5 g MgSO4·7H2O5 g 用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。6. 稀释时，使用SOC培养基。7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
