| 本系列制品是基于Gubler and Hoffman方法 (Gene (1983) 25:263-269)， 由各种Poly(A)+ RNA制作的质粒DNA型cDNA文库。合成cDNA片段时，使用了含有限制酶Not I位点的Oligo (dT)18 Linker Primer和BamH I (Bgl II)-Sma I 接头，通过这两个限制酶位点，使cDNA片段定向克隆到载体中。克隆前，做了短片段的分离处理，300 bp以下的片段大部分被去除掉。初级文库构建完成后，采用了固体平板培养法，仅对初级文库进行一次扩增，然后使用质粒提取试剂盒，从扩增文库的菌体中提取质粒，调整得到扩增的质粒cDNA文库。使用这种方法得到的扩增文库，尽可能保持了各种cDNA片段的克隆在初级文库中所占的比例。 ■ 保存-20℃。 ■ cDNA文库使用的载体和多克隆位点本cDNA文库制品使用的载体为pAP3neo，含有SV40启动子，可以在哺乳动物细胞中进行表达。同时，该载体含有ssDNA生成的必要f1 ori、也含有便于RNA合成的T7及T3 RNA聚合酶启动子。GenBank Accession No.AB0034681. cDNA片段克隆在pAP3neo载体的Bgl II位点和Not I位点之间。* 由于cDNA片段合成时，使用了BamH I (Bgl II)-Sma I接头，克隆后，载体的Bgl II 位点失效，不能再被Bgl II酶切开。2. Xba I 位点受dam methylase的影响。 ■ 用途对未知或已知的cDNA进行PCR筛选。 |
