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| ■ 制品内容 (25 μl反应×120次量、 各20次×6种) |
| 2X CycleavePCR Reaction Mix (2×conc.)750 μl×2（120 次）Primer·Probe Mix-1 (for beef) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-2 (for pork) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-3 (for chicken) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-4 (for rabbit) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-5 (for horse meat) (5X conc.)*1100 μl（20 次）Primer·Probe Mix-6 (for mutton) (5X conc.)*1100 μl（20 次）dH2O1 mlControl DNA for beef*250 μl（10 次）Control DNA for pork*250 μl（10 次）Control DNA for chicken*250 μl（10 次）Control DNA for rabbit*250 μl（10 次）Control DNA for horse meat*250 μl（10 次）Control DNA for mutton*250 μl（10 次） *1 含有荧光标记探针，要注意避光。。*2 Control DNA为确认反应性能的阳性对照，浓度约为 2 ng/μl。 Limited Use Label License: [M40], [M46], [L4] |
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| ■ 制品说明 |
| CycleavePCR 肉种鉴定Kit (6种) 是以线粒体DNA上Cytochrome C oxidase Subunit I (COX I) 基因区域的动物物种间多态性为基础，对牛、猪、鸡、马、羊、兔6种肉类进行鉴定，使用Thermal Cycler Dice Real Time System II等Real Time PCR专用仪器进行扩增检测。PCR法是以微量的DNA为模板，对目的基因进行特异性扩增的技术。由DNA热变性、引物退火、DNA聚合酶作用下引物的延伸三个步骤循环往复，可以在短时间内扩增DNA达100万倍以上。使用Real Time PCR专用扩增仪可对扩增产物进行实时监测。本制品中的DNA聚合酶采用了Hot Start PCR专用酶Takara Ex Taq HS，可以在更短时间内进行高灵敏度的检出，并能有效防止在热循环前由引物错配或引物二聚体产生的非特异性扩增。Kit中使用了COX I 区域设计的特异性引物，对各动物物种进行特异性扩增，并使用与各物种扩增产物特异性结合的探针进行检测。该检测使用了Cycling Probe法，Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。制品中目的基因检测用探针使用了FAM标记，内参照检测用探针使用了ROX标记，在同一反应管内对目的基因及内参照 (Internal Control) 同时进行扩增，通过两种不同荧光标记探针可以对目的基因和内参基因同时检定，实现双通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果的产生。使用Real Time PCR进行检测，无需电泳便可迅速判定结果 (约80 min) 。 本制品中含有确认PCR扩增反应是否正常的阳性对照用模板、引物和检出用探针，可确认反应液中有无PCR阻害物。 ■ 保存-20℃。 ■ 操作注意1. Real Time PCR仪的使用请按照说明书进行。2. 如果探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确检测。实验者的汗液和唾液也可能会带入核酸酶，操作中应注意。3. 建议从反应液的配制到检测样品的添加，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离（参考“补充：关于区域划分”）。在各区域要避免开闭含有扩增产物的反应管。区域1：反应液的配制及分装。区域2：检测样品的制备。区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。由于本Kit使用了Real Time PCR的方法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物无需进行电泳。另外，为了避免污染，严禁从Tube中取出扩增产物。 |
