B族溶血性链球菌(Streptococcus agalactiae ;GBS)属于革兰氏阳性菌,是人泌尿生殖道和肠道的常在菌,新生儿败血症及出生后3个月时的脑膜炎、高龄者的侵袭性感染主要是由B族溶血性链球菌感染所引起的。通过培养检测GBS时,存在检测时间长、检测灵敏度低等问题。 本制品是以GBS来源的编码组氨酸激酶的dltS基因为目的基因,使用Real Time PCR仪,可快速对所有GBS进行特异性检测的试剂盒。 本制品使用了Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq® HS,可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增。本制品采用Cycling Probe法进行检测,Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法,能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基,一端标记荧光物质,另一端标记荧光淬灭物质,当探针处于完整状态时,由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光,但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后,RNase H在RNA部分将探针切断,淬灭抑制作用解除,荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度,能够实时监控扩增产物量。 制品中检测GBS来源的dltS基因用探针的荧光物质使用了FAM标记,内参照(Internal Control)检测用探针的荧光物质使用了ROX标记。在同一反应管内可以对GBS的特异性dltS基因及内参照同时进行扩增,通过两种不同荧光标记的探针可以对dltS基因及内参照同时检出。其中,对内参照反应的检测,可以监控反应是否正常进行,防止假阴性结果。本检测无需电泳,简单快速。 本制品是与Dr.Kimiko Ubukata,Department of Infectious Diseases,Keio University School of Medicine 联合研发的。 |