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TaKaRa 一步法RNA反转录PCR扩增试剂盒(AMV)

品名: TaKaRa 一步法RNA反转录PCR扩增试剂盒(AMV)
品牌: TaKaRa
型号: RR024A
  • 产品详情
  • 规格参数
  • 商品名称:TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)

  • 商品编号:SPU2021050499

  • 上架时间:2022-01-06






■ 制品内容 (Code No.: RR024A : 50 次量)
AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl)50 μlRNase Free dH2O1 ml × 2 支RNase Inhibitor (40 U/μl)50 μlAMV-Optimized Taq (5 U/μl)50 μl10X One Step RNA PCR Buffer250 μldNTP Mixture (各10 mM)250 μlMgCl2 (25 mM)500 μlControl F-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用上游引物)25 μlControl R-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用下游引物)25 μlPositive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)25 μl  *1:各种引物序列
引物名称各引物序列Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

*2:本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。

图1. Positive Control RNA:进行Control实验时所能扩增的DNA片段


■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA,RNA不能直接被扩增,但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后,PCR法便可应用于RNA的解析了。目前,此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。本试剂盒采用了一步反应法 (One Step法) 完成RT-PCR反应。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中进行,反应中途不需添加任何试剂,就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由来的反转录酶从RNA反转录为cDNA,再由AMV-Optimized Taq (根据LA PCR技术研制) 扩增cDNA的全部反应。常规RT-PCR试剂盒采用2 step PCR进行连续反应,并分别配制反应液,这些操作增加了污染的可能性,而本试剂盒可降低污染,并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本试剂盒中含有进行One Step法RT-PCR反应用的全部试剂,可以简便而有效地对RNA进行扩增分析。 
■ 保存
-20℃。

■ One Step RT- PCR的原理
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反应管中完成由AMV 反转录酶从RNA反转录为cDNA,再使用AMV-Optimized Taq扩增此cDNA的RT-PCR反应。
图2. One Step RT-PCR原理图

■ 特点
      RNA模板     适用于所有RNA      扩增片段大小     ~5.6 kb      反转录酶    AMV Reverse Transcriptase XL (反转录反应温度在42℃~60℃)      反转录引物     特异性下游引物(PCR扩增反应用反义链引物)(不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer)      DNA Polymerase     AMV-Optimized Taq      RNase Inhibitor     Kit中含有      操作     在同一反应管中连续进行 (PCR反应前加热使RTase失活)

■ 注意事项
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液(Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶类时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出,使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 为了防止Positive Control RNA分解,应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃~-80℃。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip),以防止样品间污染。
6. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物,Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。


TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV)
品牌CodeNo.产品名称包装量
TakaraRR024ATaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV)50次
TakaraRR024B(A×2)TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV)100次


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